Bà Nguyễn Thị Định sinh ngày 15/3/1920 tại xã Lương Hòa, Giồng Trôm Bến Tre. Năm 1936, khi vừa tròn 16 tuổi được sự dìu dắt của anh trai bà đã tham gia hoạt động cách mạng. Năm 1938, bà được kết nạp vào Đảng Cộng sản Đông Dương.
Năm 1939, bà kết hôn với người đồng chí cùng hoạt động cách mạng là ông Nguyễn Văn Bích, Tỉnh ủy viên Tỉnh ủy Bến Tre. Khi sinh con trai được 3 ngày chồng bà bị mật thám đến nhà vây bắt và kết án 5 năm tù đày ra Côn Đảo. Ông đã hy sinh sau đó không lâu. Tháng 7/1940 bà Nguyễn Thị Định và con trai mới 7 tháng tuổi lại bị mật thám lùng bắt và giam giữ tại Bến Tre. Trước khi bị chính quyền thực dân đưa đi đày ở nhà tù Bà Rá bà phải gửi con nhỏ lại cho bà ngoại chăm sóc.
Năm 1944 bà ra tù và tiếp tục hoạt động cách mạng. Trong cuộc giành chính quyền năm 1945 bà là người đi đầu dẫn hàng nghìn người dân tiến vào giành chính quyền ở thị xã Bến tre. Tháng 3/1946, bà cùng với đoàn cán bộ miền Nam vượt biển ra miền Bắc báo cáo với trung ương Đảng và Bác Hồ về tình hình chiến trường Nam Bộ, xin chi viện được 12 tấn vũ khí về miền Nam.
Sau đó bà trở thành Đoàn trưởng phụ nữ cứu quốc tỉnh, Ủy viên mặt trận Liên Việt tỉnh, Tỉnh ủy viên tỉnh Bến Tre, Bí thư huyện Mỏ Cày, Thường vụ tỉnh ủy bí mật tỉnh Bến Tre, Phó Bí thư tỉnh ủy Bến Tre và chỉ đạo phong trào Đồng Khởi năm 1960. Tên tuổi bà gắn với phong trào Đồng khởi và sự ra đời “Đội quân tóc dài”. Từ sau Đồng Khởi bà Nguyễn Thị Định lần lượt giữ các chức vụ: Bí thư Tỉnh ủy, Chủ tịch Mặt trận Giải phóng miền Nam Việt Nam; Hội trưởng Hội LHPN Giải phóng miền Nam, Phó tư lệnh các lực lượng Giải phóng miền Nam Việt Nam. Năm 1974, bà trở thành nữ tướng đầu tiên của quân đội nhân dân Việt Nam khi được phong hàm thiếu tướng.
Sau Giải phóng, bà là Ủy viên Trung ương Đảng các Khóa IV, V, VI, Đại biểu Quốc hội các Khóa VI, VII, VIII, đồng thời giữ nhiều chức vụ như Thứ trưởng Bộ LĐ-TB-XH, Bí thư Đảng đoàn Chủ tịch Trung ương Hội LHPN Việt Nam, Phó chủ tịch Hội đồng nhà nước, Chủ tịch Hội Hữu nghị VN – Cu Ba và có nhiều đóng góp tích cực trong công cuộc đổi mới toàn diện Đảng Cộng sản Việt Nam, đặc biệt là đổi mới hoạt động của Quốc hội, Hội đồng Nhà nước. Ngày 30.8.1995, bà được truy tặng danh hiệu Anh hùng lực lượng vũ trang nhân dân. Ngày 26.8.1992 bà mất, hưởng thọ 72 tuổi.
